ບົດນຳ

ໃນຫ້ອງທົດລອງຊີວະວິທະຍາ ແລະ ເຄມີທີ່ທັນສະໄໝ,ທໍ່ເພາະເຊື້ອທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການເພາະເຊື້ອຈຸລັງ, ປະຕິກິລິຍາເຄມີ, ການຮັກສາຕົວຢ່າງ ແລະ ການປະຕິບັດງານທີ່ສຳຄັນອື່ນໆ.ຄວາມສຳຄັນຂອງພວກມັນໃນຂະບວນການທົດລອງບໍ່ສາມາດຖືກລະເລີຍໄດ້. ເນື່ອງຈາກທໍ່ເພາະເລี้ยงເຫຼົ່ານີ້ຕິດຕໍ່ໂດຍກົງກັບຕົວຢ່າງການທົດລອງ, ວັດສະດຸ, ຂະໜາດ, ການປິດ ແລະ ເຖິງແມ່ນວ່າພວກມັນຈະຖືກຂ້າເຊື້ອແລ້ວຫຼືບໍ່ກໍຕາມ ຈະມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ຜົນການທົດລອງ. ການຄັດເລືອກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງອາດຈະນໍາໄປສູ່ການປົນເປື້ອນຂ້າມ, ການສູນເສຍຕົວຢ່າງ ຫຼື ອະຄະຕິຂອງຂໍ້ມູນການທົດລອງ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຖືກຕ້ອງ ແລະ ຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳຂອງການສຶກສາ.

ປະເພດຫຼັກຂອງທໍ່ເຊື້ອພະຍາດທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມ

ມີຫຼອດເຊື້ອທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມຫຼາກຫຼາຍຊະນິດ, ແລະ ນັກຄົ້ນຄວ້າຈຳເປັນຕ້ອງເລືອກປະເພດທີ່ຖືກຕ້ອງຕາມຈຸດປະສົງຂອງການທົດລອງ, ສະພາບແວດລ້ອມການດຳເນີນງານ ແລະ ລັກສະນະຂອງຕົວຢ່າງ. ພວກມັນຖືກຈັດປະເພດເປັນສາມດ້ານຕໍ່ໄປນີ້: ວັດສະດຸ, ຄວາມຈຸ ແລະ ໜ້າທີ່ພິເສດ:

1. ການຈັດປະເພດຕາມວັດສະດຸ

ທໍ່ເພາະເຊື້ອທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມທີ່ເຮັດດ້ວຍວັດສະດຸທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີຄວາມຕ້ານທານອຸນຫະພູມ, ຄວາມໝັ້ນຄົງທາງເຄມີ ແລະ ຄຸນສົມບັດທາງດ້ານແສງແຕກຕ່າງກັນ:

• ໂພລີໂພຣພີເລນe: ຕ້ານທານໄດ້ດີກັບອຸນຫະພູມສູງ ແລະ ການກັດກ່ອນທາງເຄມີ, ເໝາະສົມສຳລັບການເພາະເລี้ยงຈຸລັງປົກກະຕິ, ການທົດລອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ ແລະ ການນຳໃຊ້ອື່ນໆ.
• ໂພລີສະໄຕຣີນ: ຄວາມໂປ່ງໃສສູງ, ງ່າຍຕໍ່ການສັງເກດເຫັນສະພາບຂອງແຫຼວ ແລະ ເຊວ, ນິຍົມໃຊ້ໃນການທົດສອບທາງແສງ, ແຕ່ບໍ່ທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມສູງ, ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວບໍ່ສາມາດໃຊ້ສໍາລັບການອັດຄວາມຮ້ອນໄດ້.
• ທໍ່ວັດທະນະທໍາແກ້ວເຖິງແມ່ນວ່າຈະນຳມາໃຊ້ຄືນໄດ້ ແລະ ມີຄວາມໝັ້ນຄົງທາງເຄມີ, ແຕ່ມັນມີລາຄາແພງ, ຕ້ອງການຂັ້ນຕອນການທຳຄວາມສະອາດ ແລະ ການຂ້າເຊື້ອເພີ່ມເຕີມ, ແລະ ມີຄວາມສ່ຽງທີ່ອາດເກີດຂຶ້ນຈາກການປົນເປື້ອນຂ້າມ.

2. ການຈັດປະເພດຕາມຄວາມຈຸ

ອີງຕາມປະລິມານຂອງຕົວຢ່າງທີ່ຕ້ອງການສຳລັບການທົດລອງ, ຄວາມຈຸຂອງທໍ່ເພາະເຊື້ອມີຕັ້ງແຕ່ປະລິມານຈຸລະພາກຈົນເຖິງປະລິມານຫຼາຍ:

• ທໍ່ປั่นແຍກຂະໜາດນ້ອຍ: ທົ່ວໄປໃຊ້ສຳລັບການແຈກຕົວຢ່າງ, ການຕົກຕະກອນແບບ centrifugal, ການສະກັດ DNA/RNA ແລະ ການດຳເນີນງານອື່ນໆ.
• ທໍ່ເຊື້ອພະຍາດມາດຕະຖານ: ຄວາມຈຸທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສຸດໃນຫ້ອງທົດລອງ, ເໝາະສຳລັບການເພາະເລี้ยงຈຸລັງ, ປະຕິກິລິຍາປະສົມ, ການຮັກສາຕົວຢ່າງ ແລະ ຈຸດປະສົງອື່ນໆ.
• ທໍ່ເພາະເຊື້ອທີ່ມີຄວາມຈຸຂະໜາດໃຫຍ່: ເໝາະສຳລັບການເພາະເລี้ยงຈຸລັງຂະໜາດໃຫຍ່ ຫຼື ການປຸງແຕ່ງສານລະລາຍໃນປະລິມານຫຼາຍ.

3. ການຈັດປະເພດຕາມໜ້າທີ່ພິເສດ

ທໍ່ເຫຼົ່ານີ້ມີຄຸນສົມບັດເພີ່ມເຕີມທີ່ຫຼາກຫຼາຍເພື່ອຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການການທົດລອງສະເພາະ:

• ທໍ່ປອດເຊື້ອທີ່ຜ່ານການຂ້າເຊື້ອແລ້ວ: ໂຮງງານຂ້າເຊື້ອດ້ວຍລັງສີແກມມາ ຫຼື ການອັດຄວາມຮ້ອນສູງ, ເໝາະສຳລັບການທົດລອງທີ່ມີຄວາມຕ້ອງການສູງໃນການຂ້າເຊື້ອ.
• ມີຝາປິດຕະຫຼັບໝຶກ: ອະນຸຍາດໃຫ້ມີການແລກປ່ຽນອາຍແກັສ, ເໝາະສຳລັບຈຸລິນຊີ ຫຼື ສາຍເຊວທີ່ຕ້ອງການການລະບາຍອາກາດ ແລະ ປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນຈາກແຫຼ່ງພາຍນອກ.
• ທໍ່ທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມຕໍ່າສາມາດໃຊ້ໄດ້ຢ່າງປອດໄພໃນ -80 ℃ ຫຼືແມ້ກະທັ້ງສະພາບແວດລ້ອມໄນໂຕຣເຈນແຫຼວ, ເໝາະສົມສຳລັບການຮັກສາຕົວຢ່າງທາງຊີວະພາບໃນອຸນຫະພູມຕ່ຳໃນໄລຍະຍາວ.
• ທໍ່ທີ່ມີລະດັບ/ບໍ່ມີລະດັບທໍ່ທີ່ມີລະດັບຄວາມເລິກແມ່ນສະດວກຕໍ່ການປະເມີນ ແລະ ການແຈກຈ່າຍປະລິມານຂອງແຫຼວຢ່າງວ່ອງໄວເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງການທົດລອງ.

ປັດໄຈສຳຄັນໃນການເລືອກທໍ່ເຊື້ອພະຍາດ

ໃນຂະບວນການອອກແບບ ແລະ ດຳເນີນງານທົດລອງ, ການເລືອກທໍ່ເຊື້ອທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມທີ່ເໝາະສົມແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍເພື່ອຮັບປະກັນປະສິດທິພາບ ແລະ ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜົນໄດ້ຮັບໃນການທົດລອງ. ນັກຄົ້ນຄວ້າຄວນພິຈາລະນາຢ່າງຄົບຖ້ວນກ່ຽວກັບປັດໄຈສຳຄັນຈຳນວນໜຶ່ງຄື:

1. ປະເພດຂອງການທົດລອງ

ຂໍ້ກຳນົດສຳລັບທໍ່ເພາະເລี้ยงແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຈາກການທົດລອງໜຶ່ງຫາອີກການທົດລອງໜຶ່ງ ແລະ ຄວນເລືອກຕາມເນື້ອໃນຂອງການດຳເນີນງານ ແລະ ສະພາບແວດລ້ອມຂອງການທົດລອງ:

• ສຳລັບການເພາະເລี้ยงຈຸລັງ: ຂໍ້ກຳນົດສຳລັບການເປັນໝັນແມ່ນສູງຫຼາຍ, ແລະ ແນະນຳໃຫ້ໃຊ້ທໍ່ທີ່ຂ້າເຊື້ອແລ້ວພ້ອມຝາປິດຫຼອດລົມທີ່ລະບາຍອາກາດໄດ້ເພື່ອຮັບປະກັນການແລກປ່ຽນອາຍແກັສ.
• ການທົດລອງ PCR / ຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ: ຕ້ອງບໍ່ມີເອນໄຊມ໌ DNA, ເອນໄຊມ໌ RNA ແລະທໍ່ທີ່ບໍ່ມີໄພໂຣເຈນ, ມັກໃຊ້ທໍ່ໂພລີໂພລີລີນຊັ້ນທີ່ສະອາດ.
• ການເກັບຮັກສາໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ: ຄວນໃຊ້ທໍ່ທີ່ມີຄວາມຕ້ານທານອຸນຫະພູມຕໍ່າດີເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການລະລາຍໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ.

2. ລັກສະນະຕົວຢ່າງ

ຄຸນສົມບັດທາງກາຍະພາບແລະເຄມີຂອງຕົວຢ່າງມີອິດທິພົນໂດຍກົງຕໍ່ການເລືອກວັດສະດຸແລະການຕັ້ງຄ່າໜ້າທີ່ຂອງທໍ່ເພາະເລี้ยง:

• ຕົວຢ່າງຂອງແຫຼວ ຫຼື ຂອງແຂງ: ກຳນົດປະລິມານທີ່ຕ້ອງການ ແລະ ຮູບແບບຂອງຮູທໍ່.
• ຕົວຢ່າງກົດ ຫຼື ດ່າງຕົວຢ່າງທີ່ມີການກັດກ່ອນສູງຕ້ອງການວັດສະດຸທີ່ທົນທານຕໍ່ສານເຄມີເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜິດຮູບ ຫຼື ການປົນເປື້ອນຂອງທໍ່.
• ບໍ່ວ່າຈະຫຼີກລ່ຽງແສງສະຫວ່າງຕົວຢ່າງທີ່ລະອຽດອ່ອນຕໍ່ແສງຄວນເລືອກທໍ່ສີອຳພັນ ຫຼື ທໍ່ເພາະເລี้ยงວັດສະດຸທີ່ຂຸ່ນເພື່ອປ້ອງກັນການເສື່ອມສະພາບຂອງແສງ.

3. ຂໍ້ກຳນົດກ່ຽວກັບການຂ້າເຊື້ອ

ຄວາມຕ້ອງການໃນການຂ້າເຊື້ອ ແລະ ປະເພດຂອງການຂ້າເຊື້ອທີ່ໃຊ້ແມ່ນການພິຈາລະນາທີ່ສຳຄັນໃນການເລືອກທໍ່:

• ການຂ້າເຊື້ອກ່ອນການຂ້າເຊື້ອທຽບກັບການຂ້າເຊື້ອດ້ວຍຕົນເອງຜະລິດຕະພັນທີ່ຜ່ານການຂ້າເຊື້ອແລ້ວຈາກໂຮງງານແມ່ນເໝາະສົມສຳລັບການທົດລອງທີ່ມີຜົນຜະລິດສູງ, ປະຫຍັດເວລາ; ຖ້າຫ້ອງທົດລອງມີອຸປະກອນຂ້າເຊື້ອດ້ວຍເຄື່ອງ autoclave, ທ່ານສາມາດເລືອກທໍ່ PP ທີ່ສາມາດ autoclave ໄດ້.
• ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງການຂ້າເຊື້ອຕົວຢ່າງ, ວັດສະດຸ PS ບໍ່ເໝາະສົມສຳລັບການປຸງແຕ່ງດ້ວຍເຄື່ອງອັດຄວາມຮ້ອນ ແລະ ສຳລັບການນຳໃຊ້ຄັ້ງດຽວເທົ່ານັ້ນ.

4. ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້

ທໍ່ຄວນໄດ້ຮັບການປັບໃຫ້ເໝາະສົມກັບອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງເພື່ອຮັບປະກັນການເຮັດວຽກທີ່ລຽບງ່າຍ ແລະ ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ໜ້າເຊື່ອຖື:

• ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງແຮງเหวี่ยงเหวี่ยงທໍ່ທີ່ໃຊ້ສຳລັບການປั่นແຍກຕ້ອງມີໂຄງສ້າງທີ່ແຂງແຮງເພື່ອຕ້ານທານກັບແຮງໜີສູນກາງທີ່ຄວາມໄວໝູນສູງ.
• ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງລະບົບອັດຕະໂນມັດສຳລັບການທົດລອງທີ່ຕ້ອງການໃຊ້ຫຸ່ນຍົນ pipetting, ລະບົບການແຈກຈ່າຍອັດຕະໂນມັດ, ແລະອື່ນໆ, ຕ້ອງໃຊ້ຂະໜາດທໍ່ທີ່ໄດ້ມາດຕະຖານ.

5. ຕົ້ນທຶນ ແລະ ຄວາມຍືນຍົງ

ການຄວບຄຸມຕົ້ນທຶນ ແລະ ການໃຊ້ຊັບພະຍາກອນຢ່າງສົມເຫດສົມຜົນຍັງເປັນການພິຈາລະນາທີ່ສຳຄັນໃນການຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການດ້ານການທົດລອງ:

• ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມ vs ໃຊ້ຄືນໄດ້: ທໍ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມແມ່ນງ່າຍຕໍ່ການຈັດການ ແລະ ຫຼີກລ່ຽງການປົນເປື້ອນ, ເໝາະສຳລັບການທົດລອງທີ່ມີຜົນຜະລິດສູງ; ທໍ່ແກ້ວທີ່ໃຊ້ຄືນໄດ້ແມ່ນເໝາະສຳລັບການທົດລອງຂັ້ນພື້ນຖານທີ່ມີງົບປະມານຈຳກັດ.
• ຂະໜາດການຊື້ການຊື້ໃນປະລິມານຫຼາຍສາມາດຫຼຸດລາຄາຕໍ່ໜ່ວຍໄດ້, ເໝາະສຳລັບໂຄງການຂະໜາດໃຫຍ່ໃນໄລຍະຍາວ; ລາຍລະອຽດຂະໜາດນ້ອຍທີ່ກຳນົດເອງໄດ້ແມ່ນມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນຫຼາຍກວ່າແຕ່ມີຄ່າໃຊ້ຈ່າຍສູງ.

ຄຳແນະນຳສຳລັບສະຖານະການການນຳໃຊ້ທົ່ວໄປ

ອີງຕາມຄວາມຕ້ອງການສະເພາະຂອງການທົດລອງປະເພດຕ່າງໆ, ທໍ່ເຊື້ອພະຍາດທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ສໍາລັບສະຖານະການນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປຫຼາຍຢ່າງ, ໂດຍມີຈຸດປະສົງເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບແລະຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືຂອງການທົດລອງ:

1. ການປູກຝັງຈຸລັງ

• ປະເພດທີ່ແນະນຳ: ທໍ່ເພາະເຊື້ອໂພລີໂພລີລີນທີ່ເປັນໝັນ ພ້ອມດ້ວຍຝາປິດຕະຫຼັບໝຶກທີ່ລະບາຍອາກາດໄດ້
• ເຫດຜົນວັດສະດຸໂພລີໂພຣພີລີນມີຄວາມเฉื่อยชาທາງເຄມີ ແລະ ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ທາງຊີວະພາບທີ່ດີ, ເໝາະສຳລັບນ້ຳເຊື້ອຈຸລັງ. ຝາປິດຕະຫຼັບໝຶກສາມາດຮັບຮູ້ການແລກປ່ຽນອາຍແກັສທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນຂອງຈຸລິນຊີ, ແລະ ຕອບສະໜອງສະພາບແວດລ້ອມອາຍແກັສທີ່ຕ້ອງການສຳລັບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ.

2. ການຮັບຮູ້ໂມເລກຸນ PCR/qPCR

• ປະເພດທີ່ແນະນຳ: ທໍ່ PCR ພິເສດທີ່ບໍ່ມີນິວເຄຼຍສ, ບໍ່ມີໄພໂຣເຈນ ຫຼື ທໍ່ຈຸນລະພາກຂະໜາດນ້ອຍ
• ເຫດຜົນ: ທໍ່ໂພລີໂພລີລີນທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງ, ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ສາມາດຫຼີກລ່ຽງການເສື່ອມສະພາບຂອງຕົວຢ່າງ ຫຼື ການປົນເປື້ອນໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ, ເພື່ອຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບການຂະຫຍາຍທີ່ຖືກຕ້ອງ ແລະ ໜ້າເຊື່ອຖື. ການອອກແບບຝາບາງໆແມ່ນແນະນຳເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຖ່າຍໂອນຄວາມຮ້ອນ.

3. ການເກັບຮັກສາໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ

• ປະເພດທີ່ແນະນຳທໍ່ໂພລີໂພຣພີລີນທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມຕ່ຳພ້ອມດ້ວຍການອອກແບບການແຕກຕ້ານການແຂງຕົວ ແລະ ຝາປິດປະທັບຕາສະກູ
• ເຫດຜົນທໍ່ເຫຼົ່ານີ້ສາມາດໃຊ້ເພື່ອເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງໄດ້ເປັນເວລາດົນນານໃນອຸນຫະພູມ -80°C ຫຼືແມ່ນແຕ່ໃນໄນໂຕຣເຈນແຫຼວ, ແລະໂຄງສ້າງພິເສດຊ່ວຍປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ທໍ່ແຕກງ່າຍ ແລະ ຕົວຢ່າງຮົ່ວໄຫຼ. ເໝາະສຳລັບການເກັບຮັກສາເຊວ, ຕົວຢ່າງເລືອດ, ໂປຣຕີນ ຫຼື ກົດນິວເຄຼຍອິກໃນໄລຍະຍາວ.

4. ເຄື່ອງປั่นແຍກ

• ປະເພດທີ່ແນະນຳທໍ່ໂພລີໂພລີລີນທົນທານສູງ, ການອອກແບບດ້ານລຸ່ມຮູບຊົງກົມ ຫຼື ຮູບຈວຍ, ພ້ອມດ້ວຍໂລເຕີປั่นແຍກ
• ເຫດຜົນທໍ່ PP ມີຄວາມຕ້ານທານກັບແຮງໜີສູນກາງທີ່ດີ ແລະ ສາມາດທົນທານຕໍ່ແຮງໜີສູນກາງສູງໂດຍບໍ່ມີການຜິດຮູບ ຫຼື ແຕກ. ດ້ານລຸ່ມຮູບຈວຍຊ່ວຍໃນການເກັບກຳຈຸລັງ ຫຼື ຕົກຕະກອນຢູ່ໃຈກາງ ແລະ ເພີ່ມອັດຕາການຟື້ນຕົວ.

ຄວາມຜິດພາດທົ່ວໄປ ແລະ ວິທີການຫຼີກລ່ຽງພວກມັນ

ໃນທາງປະຕິບັດ, ຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງການທົດລອງຍ້ອນການເລືອກທໍ່ເພາະເຊື້ອທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງເກີດຂຶ້ນເປັນບາງຄັ້ງຄາວ. ຄວາມຜິດພາດທົ່ວໄປຫຼາຍຢ່າງ ແລະ ຄຳແນະນຳທີ່ສອດຄ້ອງກັນສຳລັບວິທີແກ້ໄຂແມ່ນໄດ້ລະບຸໄວ້ຂ້າງລຸ່ມນີ້ສຳລັບເປັນເອກະສານອ້າງອີງຂອງນັກຄົ້ນຄວ້າ:

1. ການໃຊ້ວັດສະດຸທີ່ບໍ່ທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມສູງໃນທາງທີ່ຜິດສຳລັບການອັດຄວາມຮ້ອນ